诺如病毒PCR检测粪便怎么处理

诺如病毒PCR检测粪便样本需经过采集、保存、运输、实验室处理四个关键环节。粪便样本处理流程主要包括专用容器采集、低温保存、生物安全运输、实验室核酸提取、PCR扩增检测。

1、专用容器采集：

使用医院提供的无菌粪便采集容器，取5-10克成型粪便或5毫升稀便。避免混入尿液或消毒剂，采集后立即旋紧容器盖，容器外标注患者信息。婴幼儿可使用肛拭子采集，拭子头需完全浸入保存液。

2、低温保存：

采集后2小时内需将样本置于2-8℃冷藏，超过2小时未检测则应冷冻于-20℃以下。病毒RNA在常温下易降解，冷冻样本需避免反复冻融，运输前需确认样本未泄漏。实验室接收时会检查样本性状，水样便需额外标注。

3、生物安全运输：

采用三级包装系统，内层为密封样本管，中层为吸水性材料填充的防漏袋，外层为专用生物安全运输箱。运输箱需保持低温并附检测申请单，标明"感染性物质"标识。跨机构运输需符合《可感染人类的高致病性病原微生物菌毒种或样本运输管理规定》。

4、实验室核酸提取：

实验室在生物安全柜内操作，采用胍盐裂解法释放病毒RNA，配合磁珠纯化技术提取核酸。每批次检测需设置阳性对照和阴性对照，提取过程需避免气溶胶产生。对于成型粪便需先进行10%悬液制备，离心后取上清液处理。

5、PCR扩增检测：

使用针对诺如病毒ORF1-ORF2连接区设计的特异性引物，采用实时荧光定量PCR技术。反应体系包含逆转录酶、Taq酶、dNTPs和荧光探针，循环参数设置95℃预变性后，进行40个扩增循环。结果判读需满足扩增曲线S型且Ct值≤35，同时符合内标检测要求。

检测前后需注意个人防护，操作者应穿戴医用防护口罩、护目镜和一次性防护服。家庭护理期间患者粪便需用含氯消毒剂处理后再冲入下水道，接触污染物后需用肥皂流动水洗手至少20秒。恢复期建议进食低脂易消化食物如米粥、馒头，避免高糖高纤维饮食加重腹泻症状。检测阴性但症状持续者需考虑复测或进行轮状病毒、腺病毒等其他肠道病原体筛查。