基因测序是什么原理？

Question

测取基因的顺序用的是基因测序，它的原理是什么？

Answer 1

DNA测序的方法有很多种，目前最常见的是双脱氧终止法了。在测序用的缓冲液中含有四种dNTP及聚合酶，测序时分成四个反应，每个反应除上述成分外分别加入2,3-双脱氧的A、C、G，T核苷三磷酸(称为ddATP，ddCTP，ddGTP，ddTTP)，然后进行聚合反应。在第一个反应物中，ddATP会随机地代替dATP参加反应一旦ddATP加入了新合成的DNA链，由于其3位的羟基变成了氢，所以不能继续延伸。所以第一个反应中所产生的DNA链都是到A就终止了。同理第二个反应产生的都是以C结尾的，第三个反应的都以G结尾，第四个反应的都以T结尾, 电泳后就可以读出序列了。

Answer 2

这个测序法，加了四种材料进去，ddT、ddA、ddG、ddC，能和原始的DNA序列配对，但因特殊的结构，导致复制终止。测定过程中，将待测样品分为4份，每份中加入一样改变后的材料。结束后，第一份中所有片段全是以ddT为终端的不同长度的序列，以此类推形成了长度不同，可以分辨出长短不同的序列，然后在看看这个序列对应的添加的材料是哪一种，就能按照序列的长短来确定相应的脱氧核苷酸了。