如何测定粪便中的大肠菌群

测定粪便中的大肠菌群主要通过实验室微生物学检测技术完成，主要有直接涂片镜检、选择性培养基培养、生化鉴定、分子生物学检测以及自动化微生物分析系统等方法。

一、直接涂片镜检

直接涂片镜检是一种快速但初步的筛查方法。操作时将粪便样本均匀涂抹在载玻片上，经过革兰染色后置于显微镜下观察。大肠菌群中的典型细菌如大肠埃希菌在镜下通常呈革兰阴性短杆菌。该方法能快速了解样本中细菌的大致形态和数量，但无法精确区分大肠菌群的具体种类，也无法区分活菌与死菌，通常作为其他定量或定性检测的辅助手段。

二、选择性培养基培养

选择性培养基培养是经典且常用的定量测定方法。将粪便样本进行系列稀释后，接种于伊红美蓝琼脂或麦康凯琼脂等选择性培养基上。这些培养基中含有的特定成分能抑制非大肠菌群细菌的生长，同时大肠菌群菌落会呈现特定的颜色和形态，例如在伊红美蓝琼脂上形成带有金属光泽的紫黑色菌落。通过计数典型菌落数，结合稀释倍数，可计算出每克粪便中的大肠菌群数，即菌落形成单位。

三、生化鉴定

生化鉴定用于在培养基础上进一步确认细菌种类。将从选择性培养基上挑取的可疑菌落，接种到一系列含有不同底物的生化反应管中，如乳糖发酵管、吲哚试验、甲基红试验等。大肠菌群具有特征性的生化反应模式，例如能发酵乳糖产酸产气。通过观察这些生化反应结果，并与标准鉴定手册比对，可以准确鉴定出大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属等具体菌种，是传统细菌鉴定的金标准之一。

四、分子生物学检测

分子生物学检测技术具有高灵敏度和特异性，尤其适用于快速检测和菌种鉴定。常用方法包括聚合酶链式反应和基因测序。针对大肠菌群特有的保守基因序列设计引物，通过扩增特定DNA片段来判断其存在。该方法不依赖于细菌培养，能直接检测粪便样本中的细菌核酸，即使对于难培养或生长缓慢的细菌也能准确识别，并能区分致病性大肠杆菌与非致病性菌株，在流行病学调查和精准诊断中应用广泛。

五、自动化微生物分析系统

自动化微生物分析系统集成了细菌培养、生化鉴定和药敏试验等功能，实现了检测流程的标准化与高效化。系统将制备好的粪便样本接种到专用的鉴定板或卡中，仪器自动进行恒温培养，并利用光学、比色或荧光原理定时检测生化反应结果。计算机数据库将反应模式与内置的菌种库进行比对，自动给出鉴定结果和可能的药敏信息。这种方法大大减少了人工操作和时间，提高了大批量样本检测的准确性和效率。

粪便大肠菌群检测是评估肠道微生态状况、诊断肠道感染及监测公共卫生安全的重要手段。进行检测前，应遵循医嘱并正确采集新鲜粪便样本于无菌容器中，尽快送检以保证结果准确。日常维护肠道健康，应注意饮食卫生，均衡摄入膳食纤维，适量补充益生菌，避免长期滥用抗生素。若检测结果异常，如菌群数量或比例显著失调，或检出特定致病菌，应及时咨询医生或检验科专业人员，结合临床症状进行综合判断与干预，切勿自行解读结果或用药。