高建军
潍坊市妇幼保健院
副主任医师
做免疫组化需要注意实验前准备、操作过程中细节以及染色后的结果判断，以确保实验结果的准确性和可靠性，同时减少操作误差。
1、样本准备注意事项
免疫组化的成功与否，很大程度上取决于样本的质量。
组织固定：标本需及时用合适的固定剂固定，例如10%的中性福尔马林溶液，避免因固定不完全或过度固定而影响抗原性。
切片厚度：组织切片厚度一般为3-5微米，太薄易损伤抗原位点，太厚会导致显微镜下染色不清晰。
脱蜡与水化：石蜡包埋组织需完全脱蜡，然后逐步水化，确保染色试剂能够充分接触切片组织。
2、实验操作注意事项
严格的实验操作可避免影响结果的干扰因素。
抗原修复：许多抗体需要进行抗原修复，可以采用热修复法或酶消化，但需根据抗体特性选择适宜的修复方法。
抗体选择与稀释：优选特异性高、灵敏度强的抗体，并根据说明书严格稀释，避免出现非特异性染色或背景染色过深情况。
温度和时间控制：孵育过程中需保持恒温和合适时间，过短或过长均会影响染色效果。
3、染色结果判断注意事项
分析染色结果时需仔细观察，注意减少误判的可能性。
对照组设置：实验需设置阴性对照和阳性对照，阴性对照可排除非特异性染色，阳性对照可判断实验步骤是否正常。
背景染色清晰度：观察染色区域分布和阳性信号强弱，异常信号需联系样本质量和实验步骤重新分析。
显色终止：染色反应进行到适度时需终止，防止染色过深，影响评估和后续实验。
实验结束后，还需妥善保存常规实验记录，如切片图片和染色结果，便于后续科研和诊断工作使用。规范化注意这些细节能大幅降低失误，提高染色结果的可靠性，同时为疾病分析和研究提供高质量的实验依据。
